ND试剂检验原理介绍

    ND试剂用于试验检测，下面，我们来介绍下ND试剂检验原理：
    本试剂盒基于实时荧光PCR平台，结合等位基因特异性扩增（ARMS）技术、野生型基因扩增抑制技术和多重PCR技术检测EGFR基因19、21外显子的14种突变。
    ARMS技术是指PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增，通过设计特异性ARMS引物组（共6条ARMS上游引物，包括5条检测19外显子突变和1条检测21外显子突变的引物）和2条下游引物，对存在突变的EGFR基因19、21外显子的靶序列进行多重PCR扩增，并利用分别标记有HEX荧光基团——BHQ1淬灭基团和FAM荧光基团——BHQ1淬灭基团的两条Taqman 探针分别实现对19，21突变外显子扩增产物进行检测。
    因为人类EGFR基因突变检测试剂盒采用了野生型基因扩增抑制剂，使ARMS体系能够耐受更高浓度的背景野生型EGFR基因，降低了试剂盒对基因组样本的DNA浓度要求，提高了检测灵敏度。 
为质控扩增体系的有效性，试剂盒设置了内质控和外质控，内质控基因是人类基因组的一个保守片段，长度与EGFR目标片段相似，均为100bp左右，内控探针采用标记ROX荧光基团——BHQ2淬灭基团的Taqman探针对内控基因扩增产物进行检测。
    内控引物、探针及内控基因对ARMS体系的扩增效率无影响。阳性对照品是一种扩增效率低的EGFR基因19外显子L747_P753>S突变质粒与野生型人类基因组DNA的混合物，用于PCR扩增的外质控。